染料木黄酮在小细胞肺癌H446细胞中通过抑制FoxM1通路发挥抗肿瘤作用
田甜甜

第一部分:染料木黄酮对小细胞肺癌H446细胞生长与迁移能力的影响
　　目的:小细胞肺癌约占新诊断肺癌总数的15％-20％，其恶性程度高，增值快，生长迅速，转移早，5年生存率低，迫切需要新的治疗手段和靶点。染料木黄酮(genistein)是最重要的大豆异黄酮之一，对多种肿瘤有预防及治疗作用，然而它在小细胞肺癌中的作用尚不清楚。本实验旨在研究genistein在小细胞肺癌H446细胞中对细胞生长和迁移能力的影响，以明确genistein在小细胞肺癌中的抗肿瘤作用。
　　方法:利用不同浓度的genistein处理H446细胞，采用CCK-8法检测genistein对H446细胞增殖能力的影响，流式细胞术分析genistein对H446细胞凋亡及细胞周期的影响，应用划痕实验检测细胞迁移能力的改变。
　　结果:H446细胞经不同浓度（0、10、25、50、75、100μmol/L）的genistein分别作用24、48、72h后，CCK-8法检测细胞增殖能力，结果显示细胞增殖受到明显抑制，且随着genistein浓度的升高及培养时间的延长，细胞增殖抑制愈明显;流式细胞术检测经不同浓度genistein处理后，H446细胞凋亡率的变化，结果发现经genistein作用72h后，细胞凋亡率随genistein浓度升高逐渐上升，DMSO对照组、25μmol/L、50μmol/L及75μmol/L组的凋亡率分别为4.8％±0.8％、12.5％±2．0％、44.5％±3.7％和54.9％±2.9％(P＜0.05);流式细胞术检测细胞周期变化，发现H446的G2/M期细胞比例由对照组的21.9％±3.3％增加至40.4％±1.6％(25μM)、61.9％±2.7％(50μM)、72.9％±4.3％（75μM），而G1及S期细胞数逐渐降低，细胞阻滞于G2/M期(P＜0.05)，即genistein可诱导H446细胞发生G2/M期细胞周期阻滞，细胞增殖受抑;划痕实验显示经genistein处理48h后，H446细胞划痕修复速率明显下降，说明genistein可明显抑制H446细胞的迁移能力。
　　结论:Genistein引起H446细胞发生与药物浓度相关的增殖抑制、凋亡增加、G2/M期细胞周期阻滞和细胞迁移能力下降，有可能成为新的有效的抗小细胞肺癌药物。
　　第二部分Genistein在小细胞肺癌H446细胞中发挥抗肿瘤作用的分子机制
　　目的:探讨genistein在小细胞肺癌H446中发挥抗肿瘤作用的分子机制。
　　方法:Westernblot及Real-timePCR检测经genistein处理后H446细胞中FoxM1基因及其下游靶基因表达的变化;FoxM1表达质粒转染H446细胞，采用CCK-8法检测FoxM1过表达前后，genistein抑制细胞增殖能力的变化。
　　结果:经genistein作用72h后，Real-timePCR实验检测H446细胞中FoxM1靶基因cyclinB1、cdc25B、survivin、p21表达情况，结果显示随genistein浓度升高，cyclinB、cdc25B、survivin表达逐渐下降，p21表达逐渐增加;Westernblot实验进一步证实FoxM1及其靶蛋白cyclinB1出现与genistein浓度相关的表达下降、p21表达增加。上述结果显示genistein可抑制FoxM1信号通路活性;该研究利用FoxM1cDNA转染H446细胞以促进FoxM1过表达，结果发现FoxM1表达上调后，genistein对H446细胞增殖抑制作用明显减弱[(55.6％±8.8％)vs(29.6％±5.0％)，P＜0.05]，说明FoxM1过表达可部分拮抗genistein的抗肿瘤增殖作用。
　　结论:Genistein在小细胞肺癌H446细胞中通过抑制FoxM1通路活性发挥抗肿瘤作用。

染料木黄酮在小细胞肺癌H446细胞中通过抑制FoxM1通路发挥抗肿瘤作用 田甜甜

染料木黄酮在小细胞肺癌H446细胞中通过抑制FoxM1通路发挥抗肿瘤作用
田甜甜