金雀异黄素诱导乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡的研究

大连医科大学临床医学系大连医科大学病理教研室大连医科大学辽宁省肿瘤干细胞研究重点实验室

目的探讨金雀异黄素(genistein,GEN)诱导乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡的分子机制.方法用0、5、10、20 μmol/L GEN处理MDA-MB-231 细胞24 h.采用CCK-8、Hoechst 33342染色和流式细胞仪测定不同浓度GEN对 MDA-MB-231细胞增殖和凋亡的影响.采用Western blotting检测不同浓度GEN处理前后MDA-MB-231细胞中Fas相关死亡域蛋白(FADD)、活性半胱天冬酶8(cleaved caspase-8)、Fas、FasL蛋白表达水平.采用实时RT-PCR分析不同浓度GEN处理前后MDA-MB-231细胞中Fas、FasL基因表达水平.多组均数比较采用方差齐性检验后进行单因素方差分析.结果在GEN作用24 h后,0、5、10和20 μmol/L组对MDA-MB-231细胞增殖的抑制率分别为(3.00±1.41)%、(14.02±1.57)%、(27.5±1.52)%、(48.90±1.44)%.与0 μmol/L组相比,5、10和20 μmol/L组呈浓度依赖性增加(F=528.119,P=0.000).两两比较显示:各浓度组之间差异均有统计学意义(P<0.05).0、5、10和20 μmol/L组诱导MDA-MB-231细胞的早期凋亡率分别为(3.40±0.40)%、(9.34±1.34)%、(19.26±0.93)%、(27.41±1.12)%.与0 μmol/L组相比,5、10和20 μmol/L组呈浓度依赖性增加(F=379.573,P=0.000).两两比较显示:各浓度组之间差异均有统计学意义(P<0.05).Western blotting结果显示,与0 μmol/L组相比,其他浓度组经GEN处理的MDA-MB-231细胞FADD、cleaved caspase-8、FasL蛋白表达升高(F=368.621、456.744、419.129,P均=0.000),Fas蛋白表达差异无统计学意义(F=0.800,P=0.528);与10(μmol/L组相比,20 μmol/L组FasL蛋白表达降低有统计学意义(F=92.235,P=0.001).实时RT-PCR结果显示,与0 μmol/L组相比,其他浓度组经GEN处理的MDA-MB-231细胞FasL mRNA表达升高(F=646.983,P=0.000),Fas mRNA表达差异无统计学意义(F=1.556,P=0.274);与10 μmol/L组相比,20 μmol/L组FasL mRNA表达降低有统计学意义(F=52.562,P=0.020).结论 GEN通过上调Fas/FasL途径中FasL基因表达诱导乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡