染料木黄酮对MKN45胃癌细胞及其皮下移植瘤抗血管生成作用的研究

超声医学工程重庆市市级重点实验室、重庆医科大学生物医学工程学院、省部共建超声医学工程国家重点实验室

目的:验证染料木黄酮(Genistein)对人胃癌细胞MKN45及其皮下移植瘤模型的抗血管生成作用,并建立以光学分子影像对其抗血管生成作用进行监测的实验方法。方法:MTT法检测Genistein对MKN45人胃癌细胞的增殖抑制作用;血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)-ELISA验证Genistein对MKN45细胞及MKN45皮下移植瘤VEGF表达的抑制作用。免疫组化检测Genistein治疗后肿瘤VEGF、CD31及Ki67表达水平的变化;将近红外荧光染料分子Dylight 680-NHS与所制备的F(ab′)2段贝伐单抗(Bevacizumab)偶联并纯化制得靶向VEGF的荧光分子探针:Dylight 680-Bevacizumab-F(ab′)2,并将其应用活体荧光显像检测Genistein对肿瘤VEGF的抑制效果。结果:MTT及Ki67检测结果表明Genistein对MKN45人胃癌细胞及其皮下移植瘤无明显的增殖抑制效果(MTT检测结果中P=0.118);VEGF-ELISA检测结果表明Genistein能够明显降低MKN45细胞(P=0.002)及其皮下移植瘤(P=0.000)VEGF的表达水平。Genistein对MKN45皮下移植瘤的治疗实验结果表明:Genistein具有一定的抑瘤疗效(P=0.034),通过免疫组化分析可知肿瘤VEGF及CD31表达水平明显降低;同时,荧光分子探针Dylight 680-Bevacizumab-F(ab′)2应用于活体荧光成像能够有效地检测皮下肿瘤VEGF表达水平的变化。结论:Genistein主要通过抑制MKN45肿瘤(细胞)VEGF的表达产生抗血管生成作用而非直接抑制肿瘤(细胞)的增殖达到抑瘤效果。荧光分子探针Dylight 680-Bevacizumab-F(ab′)2应用于活体显像能够对Genistein抗肿瘤血管生成的疗效进行早期预测,具有良好的临床转化前景。