染料木素对非小细胞型肺癌A549/DDP细胞耐药逆转及机制研究
任彦徐刚梁贵友刘达兴蔡庆勇
(遵义医学院附属医院胸心外科贵州遵义563003)
目的:以人非小细胞型肺癌A549/DDP细胞株为受试对象,以A549细胞株为对照,探讨染料木素逆
转非小细胞型肺癌A549/DDP细胞耐药性及可能的机制。
方法:①培养A549/DDP及A549细胞株,通过细胞计数法绘制A549及A549/DDP细胞生长曲线:MTT
法测定A549/DDP细胞的耐药倍数、测定染料木素对A549及A549/DDP细胞的增殖抑制作用,计算
染料木素对A549及A549/DDP细胞的半数抑制浓度,比较差异。②选择合适抑制浓度的染料木素
处理A549及A549/DDP细胞24h,在倒置显微镜卜观察两株细胞的细胞形态学变化,FMC法检测细
胞凋亡,并分析细胞周期。③选择12.5、留而浓度的染料木素联合DDP作用于A549及A549/DDP
细胞,观察其协同效应,MTT法计算出半数抑制浓度,比较差异。④选抒合适浓度染料木素作用于
A549及A549/DDP细胞2h4后,通过WesternBlot及PCR方法分别在蛋白水平和基因水平观察肺
耐药相关蛋自(LR)P及多药耐药相关蛋白(MRP)的表达。结果:①亲代A549细胞和A549,/DDP
细胞的倍增时间分别为18.15h和27.38h;经DDP处理A549及A549/DDP细胞24h后,DDP对A549
及A549/DDP细胞的半数抑制浓度(ICSO)分别为:33.585林M和76.866pM,其耐药倍数为2.288倍
;MTT法l9)d定出染料木素对A549及A549/DDP细胞的IC10及IC50分别为24.266pg/ml、80.224
pg/ml和27.594pg/ml、85.109pg/ml。②染料木素作用于A549和A549/DDP细胞后,镜下观察两
株细胞在形态上均出现了不同程度的细胞变大、细胞膜铺开变薄、边界不清,细胞核不明显的
改变;经CFM检测凋亡细胞数所占的一百分比,显示出剂量依赖关系。用25pg/m1的染料木素
作用于A549及A549/DDP细胞24h后,实验组GZ/M期与对照组细胞数比较有统计学意义(P<0.05
),组间比较GZ/M期有统计学意义(P<0.05),GO/lG期两组细胞数比较无统计学意义(P>0.05)。
③不同浓度染料木素分别作用于A549和A549/DDP细胞24h后,收获蛋白及RNA,westernBlot.
结果发现,随着染料木素浓度的增加,A549细胞及A549/DDP细胞的肺耐药相关蛋白(LR)P表达
无明显下调,但两细胞株的多耐药要相关蛋白(MR)P的表达均出现了下调;PCR结果发现,随着
染料木素浓度的增高,对A549/DDP细胞株而言,LRP及M即的表达均出现了明显下调,而对于
A549细胞,其LRP的表达经历了先上升后下降的过程,而MRP的表达却随着浓度的增加而逐渐
增加。结论:①A549/DDP细胞基本保留了亲代细胞的生长特性,但相对于其亲代细胞系A549,
确实对传统化疗药物DDP产生了耐药性。②染料木素对A549/DDP细胞有生长抑制作用,并呈
剂量依赖性,A549/DDP细胞对染料木素不具有耐药性。③染料木素可诱导A549/DDP细胞凋
亡,使细胞周期阻滞于GZM/期。④在分子水平,染料木素可下调LRP及MRP两个蛋白的表达,
但在蛋白水平,却仅下调MRP蛋白的表达。
关键词:染料木素;非小细胞型肺癌;A549/DDP细胞;凋亡;细胞周期;LRP。
