目的:卵巢癌是危害女性健康的三大妇科恶性肿瘤之一，由于缺乏早期诊断的方法，大多患者就诊时已处于晚期阶段。以肿瘤细胞减灭术为主的手术治疗，很难做到彻底治愈，接下来需要化疗来维持治疗，在女性生殖道恶性肿瘤中死亡率居于首位。虽然以铂类为主的联合化疗的应用在多数卵巢癌中起效，但是由于长期化疗的毒性作用、化疗药物耐药及停药后复发等问题，使化疗的应用，特别是在晚期卵巢癌的治疗上受到限制，在过去30年里，患者的长期生存率没有多少改善，患者5年生存率仅为20％左右。为解决这些问题，寻找新的更好的既能杀灭肿瘤细胞又能降低系统毒性的联合化疗方案成为主要研究的方向。

　　 染料木黄酮，英文名称为Genistein，化学名为4，5，7-三羟基异黄酮，为弱植物雌激素，主要存在于大豆等食物中。体内外研究表明染料木黄酮在抑制乳腺癌、前列腺癌和结肠癌肿瘤细胞生长方面有巨大作用。流行病学研究也发现，长期摄取大豆食品能降低乳腺癌、前列腺癌、结肠癌、头颈癌等的发生率，这主要归功于染料木黄酮。染料木黄酮在肿瘤的发生、发展阶段存在着多重的抑制效应，其抗肿瘤机制为调节雌激素受体、抑制酪氨酸蛋白激酶活性、抑制血管形成、增强抗氧化酶的活性、调节细胞周期、诱导细胞凋亡、抑制拓扑异构酶的活性等，与多种肿瘤的发生低风险有关。染料木黄酮也可作为一种辅助治疗药物，提高肿瘤细胞对放疗的敏感性，增强化疗药物的抗肿瘤作用，降低肿瘤的复发及转移。流行病学调查、体内外实验及抗癌机制研究等都表明，染料木黄酮具有一定程度的抑癌和防癌作用，但目前对染料木黄酮的研究也有相互矛盾的结果，需要更多的体内实验以证实。此外，尚需大样本的、前瞻性的研究来评估染料木黄酮的抗肿瘤作用，从而为卵巢癌及其他恶性肿瘤的预防及治疗提供更有力的证据。毫无疑问，大豆异黄酮类植物雌激素有着广泛的临床应用前景，有待于进一步研究。关于染料木黄酮对卵巢癌的体内研究尚少。本实验以人卵巢癌裸鼠移植瘤为模型，研究了染料木黄酮及其与紫杉醇联合应用对移植瘤的影响，为染料木黄酮在卵巢癌的临床应用提供理论依据。

方法:

　　 1细胞培养:体外常规培养人卵巢浆液性乳头状囊腺癌细胞株SKOV3，待细胞长到对数生长期，用胰蛋白酶消化成单个细胞，分瓶继续培养。

　　 2试验药物的制备:

　　 染料木黄酮的制备:Genistein由RPMI-1640配制成储备液(浓度30mg/ml)，保存于-20℃冰箱，实验时再稀释为所需浓度(5mg/ml)。 紫杉醇注射液制备:用0.9％氯化钠注射液稀释成3mg/ml浓度，即刻使用。

　　 3实验动物模型的建立及分组:实验动物采用无胸腺裸小鼠，共24只，雌性，4-5周龄，体重16-20克。将SKOV3细胞用磷酸盐缓冲液(PBS)稀释成25×106个/ml的浓度，无菌条件下接种于裸鼠背侧近后肢处皮下，每只0.2ml。随机分成对照组、染料木黄酮组、紫杉醇组、染料木黄酮+紫杉醇联合用药组。

　　 4给药方法:接种7天后开始给药，染料木黄酮组按照每只50mg/kg灌胃，每天一次，共四周。紫杉醇组按照每只30mg/kg给予腹腔注射，每周一次，共四周。联合用药组按照每天给予染料木黄酮50mg/kg灌胃，每周给予紫杉醇30mg/kg腹腔注射，共四周。对照组每天灌胃相同体积的RPMI1640，每周腹腔注射相同体积的生理盐水，共四周。

　　 5检测指标:

　　 5.1裸鼠重量和移植瘤体积、重量:每天观察裸鼠精神、饮食、二便，治疗开始及每周末测量裸鼠体重及移植瘤的最长径(a)及最短径(b)，根据公式计算移植瘤体积。停药24小时后处死裸鼠，剥取肿瘤组织，测量其重量。根据公式计算抑瘤率。

　　 5.2将肿瘤组织制作组织切片，在光镜下观察细胞形态变化。

　　 5.3用RT-qPCR技术检测肿瘤组织中miRNAlet-7的表达。

　　 5.4免疫组化检测肿瘤组织中cyclinG2的表达。

　　 6统计学方法:采用SPSS13.0统计软件对实验数据进行分析，计量资料多样本均数间比较采用析因设计资料的方差分析，以P＜0.05为差异有统计学意义。等级资料进行秩转换后采用SNK方法两两比较。
结果:

　　 1各组用药对裸鼠体重、移植瘤体积、重量及抑瘤率的影响:四组裸鼠体重无明显变化。裸鼠无明显精神萎靡、饮食不振、腹泻等情况。实验组移植瘤体积增长较对照组缓慢，用药第29天实验组的移植瘤体积均小于对照组，差异有统计学意义（P＜0.05）。联合用药组移植瘤的体积小于单一用药组，但差异无统计学意义。实验组的移植瘤重量均小于对照组，差异具有统计学意义，联合用药组的移植瘤重量小于单一用药组，但差异无统计学意义。联合用药组抑瘤率高于单一用药组。

　　 2各组肿瘤组织形态学变化:各组肿瘤组织切片光镜下可见瘤细胞具有异型性，实验组较对照组异型性程度低，可见核固缩、碎裂，其中联合用药组最明显。

　　 3各组肿瘤组织中miRNAlet-7的表达情况:实验组肿瘤组织中miRNAlet-7的表达均高于对照组，联合用药组高于单一用药组，差异有统计学意义。

　　 4各组肿瘤组织中cyclinG2的表达情况:用药组肿瘤组织中cyclinG2的表达均高于对照组，差异有统计学意义。联合用药组高于单一用药组，差异无统计学意义。
结论:

　　 1用药29天染料木黄酮组及联合用药组移植瘤的体积、重量均小于对照组，且差异有统计学意义，联合用药组的抑瘤率高于单一用药组，表明染料木黄酮具有抑制卵巢癌细胞生长的作用，且与紫杉醇联合应用能增强抗肿瘤的效果。

　　 2染料木黄酮组及联合用药组移植瘤组织中miRNAlet-7的表达均高于对照组，联合用药组最高，且差异有统计学意义，表明染料木黄酮有抑制原癌基因从而抗肿瘤的作用，并能增强紫杉醇的化疗作用。

　　 3染料木黄酮组及联合用药组移植瘤组织中cyclinG2的表达均高于对照组，差异有统计学意义，联合用药组表达最高，表明染料木黄酮有通过阻断细胞周期，抑制细胞增殖而起到抑制卵巢癌转移的作用，并能增强紫杉醇的化疗作用。