目的：通过在体外试验中金雀异黄素(Genistein)对食管癌细胞TE-13的增殖、凋亡、细胞周期及对凋亡蛋白的影响的观察，进一步探讨金雀异黄素抑制肿瘤的作用机制，从而为预防食管癌的发生及食管癌的治疗提供新的理论依据和药物。

方法：

　　1.人工体外培养食管癌细胞(TE-13)，采用四甲基偶氮唑蓝(tetrzolium-based colorimetric assay，MTT)比色法检测阴性对照组及不同浓度金雀异黄素组(10mg/L、20mg/L、40mg/L、80mg/L)，作用于食管癌细胞(TE-13)24h、48h、72h后对其增殖抑制的影响，进而了解其在抑制肿瘤细胞方面是否存在时间、浓度上的依赖。

　　2.根据MTT试验中得出的数据来选取适宜浓度，并应用倒置显微镜及透射电子显微镜观察经一定时间和浓度的金雀异黄素作用后食管癌细胞TE-13的形态学、超微结构的改变。

　　3.根据MTT得出的结果，再次选取适宜的剂量及时间，应用流式细胞术(flow cytometry，FCM)分析经不同浓度金雀异黄素影响48小时后，食管癌细胞TE-13的细胞周期分布和凋亡的变化情况。

　　4.应用免疫细胞化学(immunocytochemistry，IC)的方法定性观察阴性对照组及金雀异黄素不同浓度处理组，48h后食管癌细胞TE-13中Survivin、Caspase-3的蛋白的表达情况。

结果：

　　1.MTT比色法结果显示：不同浓度组金雀异黄素(10mg/L、20mg/L、40mg/L、80mg/L)与阴性对照组相比，浓度小于10mg/L，时间小于24小时，可促进TE-13的生长。当浓度大于10mg/L时，随着浓度的增大，逐渐由促进转为抑制。金雀异黄素对食管癌细胞TE-13的抑制随着时间的延长、浓度的提高，OD值呈逐渐下降的趋势，呈明显的剂量-效应关系和时间-效应关系。与对照组相比，均有显著性差异(P<0.05)。各处理组间比较差异同样具有统计学意义(P<0.05)，

　　2.透过倒置显微镜观察发现未经药物处理的食管癌细胞TE-13的形态多成圆形、椭圆形。较规则的成团片状生长，随着培养时间的延长，细胞数的逐渐增多，细胞之间紧密接触，贴满于整个培养瓶壁。药物处理组TE-13细胞随浓度的增加，形态逐渐变得大小不等，细胞皱缩，破裂，脱落及凋亡的细胞逐渐增多。

　　3.在透射电子显微镜下观察，正常TE-13细胞呈椭圆形，胞膜完整，表面可见大量绒毛样。细胞质内可见线粒体、粗面内质网、游离核糖体等细胞器，常染色质较丰富；药物处理组细胞表面微绒毛减少甚至消失，可见许多不规则膨出(凋亡早期信号)；细胞质中出现空泡；核染色质浓缩，新月体形成；细胞器体积变小，数量变少。

　　4.流式细胞术检测结果显示：20mg/L、40mg/L、80mg/L浓度的金雀异黄素作用于食管癌细胞TE-1348小时后，随着浓度的增加，金雀异黄素组与阴性对照组相比，G0/G1期细胞呈增多趋势，S期细胞无明显变化，G2/M期细胞呈减少趋势。提示Gen可阻滞细胞周期于G0/G1期，该作用在药物处理组中呈剂量依赖性。凋亡率在阴性对照组、及不同浓度金雀异黄素组的凋亡百分率分别为：(3.92±0.56)％、(4.17±0.71)％、(11.54±0.31)％、(22.23±0.92)％。凋亡率随金雀异黄素浓度的增加而逐渐升高。Gen不同浓度组凋亡率与阴性对照组相比，有统计学意义。(P<0.05)。

　　5.免疫细胞化学法结果显示：未经处理的食管癌细胞TE-13中，Survivin、Caspase-3主要表达于细胞浆中，部分细胞核可见棕黄色着色。经不同浓度药物处理后，按照IHS值法进行免疫组化评分，Genistein低、中、高剂量组Survivin表达值(IHS值)随着药物浓度的增大而逐渐减小，Caspase-3表达值(IHS值)则随Genistein浓度的增大而逐渐增加。对于Survivin和Caspase-3这两种蛋白，各自比较其处理组和阴性对照组的IHS值，差异均有统计学意义(P<0.05)。

结论：

　　1.经MTT试验结果发现，金雀异黄素在食管癌细胞TE-13增殖方面存在抑制作用。该作用与处理的时间和药物的浓度存在依赖性关系。

　　2.不同浓度的金雀异黄素均能够诱导食管癌细胞TE-13的凋亡，此作用存在浓度效应关系。对细胞分裂周期产生影响，阻滞细胞周期于G0/G1期。

　　3.通过免疫细胞化学法检测相关凋亡蛋白结果显示，金雀异黄素诱导食管癌细胞TE-13凋亡的机制可能是通过下调细胞中Survivin蛋白及上调Caspase－3蛋白的表达来实现的。

　　4.通过上述实验确定了金雀异黄素对食管癌细胞具有抑制增殖及诱导凋亡的作用，这为食管癌的治疗寻找低毒、有效药物提供了新的思路和理论依据。